Descrição
Apresentação: 600 uL (6 tubos, 100 uL cada)
Substitua o brometo no seu laboratório!
O Blue Green Loading Dye I é um corante fluorescente de alta sensibilidade para a detecção de ácidos nucléicos em géis de agarose. O corante exibe uma afinidade preferencial pelo DNA e seu sinal fluorescente é grandemente ampliado quando ligado à esta molécula (amplificação superior à 10X do que a gerada pela ligação com brometo de etídeo).
O limite de detecção utilizando o Blue Green Loading Dye I é de 60 pg por banda de DNA dupla fita, utilizando uma transiluminação de 300nm. Com epi-iluminação de 254nm o limite de detecção de DNA dupla fita é de 20 pg. Isto é aproximadamente 25 a 100 vezes mais sensível do que a marcação com brometo de etídeo. O corante também pode detectar DNA simples fita e RNA, entretanto a sensibilidade é menor.
O limite de detecção para oligonucleotídeos corados com Blue Green Loading Dye I é de 1-2 ng com transiluminação de 300nm. A excepcional sensibilidade do Blue Green Loading Dye I o torna útil para a detecção de produtos de PCR com poucos ciclos ou pouco DNA alvo, a detecção e análise de padrão de restrição de vetores de RNA e DNA com poucas cópias. Características espectrais
O Blue Green Loading Dye I possui excitação máxima a 494nm, e possui picos secundários de excitação em 284 nm e 382 nm. O sinal de emissão de DNA corado com Blue Green Loading Dye I é predominantemente em 521 nm. As características fluorescentes deste tampão o tornam compatível com trans e epi-iluminadores UV, transiluminadores azuis, e lasers iônicos de argônio, como o Molecular Dynamic FluorImager SI.
Ácidos nucléicos corados com Blue Green Loading Dye I também podem ser detectados com uma lâmpada UV de mão, porém com alguma perda na sensibilidade.
O Blue Green Loading Dye I é fornecido em tubos de polipropileno em solução aquosa contendo DMSO. Como todos os corantes fluorescentes, deve ser protegido da luz e armazenado em -20 C. O produto pode ser transportado entre 10-25ºC, sendo recomendável seu armazenamento em -20ºC para melhor preservação das propriedades.
Manuseio e Descarte
Como o Blue Green Loading Dye I se liga aos ácidos nucléicos, deve ser manipulado com cuidado e descartado de forma apropriada. Consulte o MSDS para as precauções de segurança recomendadas. O teste de Ames feito por um laboratório independente demonstrou que a molécula fluorescente é significativamente menos mutagênica do que o brometo de etídeo. Entretanto deve-se notar que não existem dados de mutagenicidade ou toxicidade da molécula em humanos. Pelo fato do produto ser adicionado diretamente à amostra, com uma baixa concentração da molécula fluorescente, os géis possuem uma toxicidade desprezível. Entretanto recomendamos que o gel seja incinerado.
Composição
Em sua composição o Blue Green Loading Dye I emprega reagentes de elevada pureza, a saber: Tampão corante e uma molécula de cianeto assimétrica (família de corantes sintéticos com a seguinte fórmula padrão: ArN+=CH[CH=CH]n=NAr) que liga às moléculas de DNA.
Indicações de uso
Recomendado, principalmente, para análise de DNA genômico, DNA de baixa concentração, produtos de PCR de tamanho abaixo de 300 pb. Procedimento para uso O corante deve ser completamente descongelado antes de ser utilizado, sendo recomendável aliquotá-lo em volumes menores para evitar eventual perda de sensibilidade.
Para cada 10µL de amostra de DNA a ser analisada, aplicar entre 0,5 – 1,0 µL de Blue Green Loading Dye I. O DMSO na composição do produto, não afeta a configuração do DNA que se deseja analisar. A molécula de cianeto assimétrica inclusa na composição do Blue Green Loading Dye I não afeta diretamente o DNA. A remoção do produto das amostras de DNA e de superfícies contaminadas pode ser feita com etanol 95%.
Para retirar Blue Green Loading Dye I do DNA para experimentos posteriores, precipitar durante 20 min. com etanol 95% em -20ºC, centrifugar durante 10 min. Em 4ºC, lavar duas vezes com etanol 70% centrifugando durante 5 min. a 12.000g cada vez. Ressuspender em água ou TE 1 X. Observação: uma vez que a molécula fluorescente, base deste reagente, apresenta elevada afinidade pelo vidro, não se aconselha o seu uso em cubas verticais (placas de vidro), podendo, no entanto o usuário fazer estes ensaios sob sua própria responsabilidade.
